В химията разреждането е процес на намаляване на концентрацията на вещество в разтвор. Верижното разреждане е многократно разреждане на разтвор за бързо увеличаване на разреждащия фактор. Тази процедура обикновено се провежда в експерименти, които изискват много разредени разтвори с висока точност. Например експерименти, включващи криви на концентрация по логаритмична скала или експерименти за определяне на плътността на бактериите. Верижните разреждания се използват широко в научни експерименти като биохимия, микробиология, фармакология и физика.
Стъпка
Метод 1 от 2: Извършване на основно разреждане
Стъпка 1. Определете подходящия разтвор на разредител
Много е важно да се определи течността, която да се използва за разреждане. Много разтвори са разтворими в дестилирана вода, но това не винаги е така. Ако разреждате бактерии или други клетки, направете това върху хранителна среда. Избраната от вас течност ще се използва за всички разреждания на веригата.
Ако се съмнявате кой разредител да използвате, потърсете помощ или потърсете онлайн. Потърсете примери от други, които са правили подобни разреждания на веригата
Стъпка 2. Подгответе няколко епруветки, съдържащи 9 ml разредител
Епруветките се използват за празни разреждания. Първо, поставете неразредената проба в първата епруветка, след това направете разрежданията последователно в следващите епруветки.
- Етикетирайте всички епруветки, използвани преди започване на разреждането, за да не се объркате, след като експериментът започне.
- Всяка епруветка ще се напълни с 10 разреждания, като се започне от епруветката, чието вещество не е разредено. Разреждането в първата епруветка е 1:10, последвано от 1: 100 във втората епруветка, 1: 1000 за третата и т.н. Определете количеството разреждане, което трябва да се извърши предварително, така че да не губите разтвора на разредителя.
Стъпка 3. Пригответе епруветка, съдържаща поне 2 mL неразреден разтвор
Минималното количество разтвор, който трябва да се разрежда, необходимо за извършване на това верижно разреждане, е 1 mL. Ако използвате само 1 ml, няма да остане неразреден разтвор. Етикет BLM за неразредени разтвори.
Разбъркайте добре разтвора, преди да започнете разреждане
Стъпка 4. Извършете първото разреждане
Вземете 1 ml от неразредения разтвор от епруветката BLM с пипета и я поставете в епруветка с етикет 1:10, съдържаща 9 ml разредител, след което разбъркайте добре. Сега има 1 мл неразреден разтвор в 9 мл разредител. По този начин разтворът се разрежда с коефициент на разреждане 10.
Стъпка 5. Изпълнете второто разреждане
За второто разреждане вземете 1 ml от разтвора от епруветката 1:10, след което го поставете в епруветката 1: 100, която също съдържа 9 ml от разредителя. Уверете се, че разтворът в епруветката 1:10 е напълно смесен, преди да го добавите в следващата епруветка. Отново се уверете, че разреждането в епруветката 1: 100 е напълно смесено. Разтворът от епруветката 1:10 се разрежда 10 пъти в епруветката 1: 100.
Стъпка 6. Продължете тази процедура, за да извършите по -дълги разреждания на веригата
Този процес може да се повтори толкова пъти, колкото е необходимо, за да се получи желаната концентрация на разтвора. В експерименти, използващи криви на концентрация, можете да извършвате верижни разреждания, за да произведете редица разтвори с разреждания 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.
Метод 2 от 2: Изчисляване на коефициента на разреждане и крайната концентрация
Стъпка 1. Изчислете съотношението на последното разреждане във верижното разреждане
Общото съотношение на разреждане може да се определи чрез умножаване на коефициента на разреждане от всяка стъпка към последната стъпка. Математическата илюстрация е с формулата DT = D1 x D2 x D3 x… x D, ДT е общият коефициент на разреждане и D е съотношението на разредителя.
- Например, да речем, че правите разреждане 1:10 4 пъти. Включете разредителя във формулата: DT = 10 x 10 x 10 x 10 = 10 000
- Факторът на разредител в четвъртата епруветка в това разреждане на веригата е 1: 10 000. Концентрацията на веществото след разреждането е 10 000 пъти по -ниска, отколкото преди разреждането.
Стъпка 2. Определете концентрацията на разтвора след разреждане
За да определите крайната концентрация на разтвора след разреждане на веригата, трябва да знаете неговата първоначална концентрация. Формулата е Cкрай = Cначалото/D, Cкрай е крайната концентрация на разредения разтвор, Сначалото е началната концентрация на първоначалния разтвор и D е предварително определеното съотношение на разреждане.
- Например: Ако започнете с клетъчен разтвор, чиято концентрация е 1 000 000 клетки на ml и съотношението на разреждане е 1 000, каква е крайната концентрация на разредената проба?
-
Използвайки формулата:
- ° Скрай = Cначалото/Д
- ° Скрай = 1.000.000/1.000
- ° Скрай = 1000 клетки на ml.
Стъпка 3. Уверете се, че всички единици са еднакви
Когато извършвате изчисления, уверете се, че мерните единици винаги са еднакви в края на изчислението. Ако първоначалната единица е клетки на ml, уверете се, че мерните единици остават същите в края на изчислението. Ако първоначалната концентрация е части на милион (bpd), тогава крайната концентрация също трябва да бъде в bpj единици.
